Sus primeros pobladores fueron los indios Guaraníes, cuya actividad principal era la agricultura acompañada de la caza y la pesca.
La historia de San Isidro comienza en 1580, cuando Juan de Garay realiza la repartición de las tierras ubicadas al norte de la ciudad de La Santísima Trinidad (hoy, ciudad de Buenos Aires). Dentro del llamado "Pago de La Costa o del Monte Grande" se encontraba el territorio del actual Partido de San Isidro.
Dice la leyenda que en su recorrida por dichos pagos un capitán vizcaíno, Domingo de Acassuso, tuvo un sueño por el cual promete levantar una capilla en honor a San Isidro Labrador, siendo este el origen del partido.
Si bien nada quedó de la primera capilla construida en 1707, su ubicación fue respetada. Actualmente se encuentra allí la Catedral de San Isidro.
A fines del siglo XVIII San Isidro ya era importante, pues su territorio comprendía los actuales Partidos de Vicente López, San Fernando, parte de 3 de Febrero y el barrio de Belgrano.
En esos años, las tierras destinadas a la labranza, pasaron a ser el lugar de descanso de las familias de la aristocracia porteña. A su vez, se construyeron amplias residencias rodeadas de inmensos jardines que le dieron a San Isidro ese particular aspecto que con el tiempo llegó a distinguirlo.
